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细胞骨架/细胞外基质

Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羟苯基荧光素

Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羟苯基荧光素

产品编号: A5235


品牌:ALPHABIO


CAS号: 359010-69-8


产品包装: 1mg


产品价格:¥2850.00


详细介绍

产品信息

Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羟苯基荧光素   A5235   1mg     -20ºC 避光保存

产品描述
氨基苯基荧光素(APF)和羟苯基荧光素(HPF)是由T. Nagano 开发的两种活性氧(Reactive oxygen species, ROS)指示剂,比 H2DCFDA(DCFH-DA, DCFH)具更优秀的特异性和稳定性。APF 和 HPF 显示有限的非选择性反应,和相对较高的光诱导氧化抗性。APF 和 HPF 具细胞膜渗透性,本身无荧光,直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应,还能与次氯酸阴离子反应,产生强绿色荧光(Ex/Em,~490/515nm),可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。
本品以粉末形式提供,可直接溶于无水 DMF 配制成 5mM 储存液,常用工作浓度范围 1-10μM,需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。
产品特性
1) CAS NO.:359010-69-8
2) 同义名:3'-p-(hydroxyphenyl) fluorescein (HPF) 羟苯基荧光素
保存与运输方法
保存:-20ºC 避光干燥保存,至少 1 年有效。运输:冰袋运输。


使用方法
一、 储存液制备
将低温保存的 1mg 粉末置于室温回温至少 20min,之后加入 471μl 无水 DMF 配置成 5mM 储存液。充分溶解和混匀后,按照单次用量分装,-20ºC 避光干燥保存,避免反复冻融。
【注】:HPF 能溶于 DMSO(10mM),但有数据显示 DMSO 是羟基自由基的淬灭剂,会干扰检测和降低灵敏性。因此,建议用DMF 作为溶剂。
二、 溶液体系检测
正式实验前,取一管HPF 储存液置于室温回温,使其充分融解。之后用合适的缓冲液(比如HHBS 缓冲液, PBS 缓冲液)稀释到所需的工作浓度。建议起始浓度为 1-10μM,需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。
三、 细胞体系检测
以下实验步骤仅做参考,最佳的工作浓度、孵育时间和温度需根据实际情况进行调整。在加入 HPF 工作液之前按需处理细胞。
1)根据具体用量,将DMF 储存液用 HHBS 缓冲液或其他生理缓冲液稀释成 1-10μM 工作液。
2)根据实验设计处理细胞(比如,RASM 细胞用 50-100nM  血管紧张素II 处理 3-5h)。
3)取步骤 1)准备的 1-10μM 工作液加入细胞,37ºC 孵育 20-60min。
4)吸掉染色工作液,用HHBS 或其他生理缓冲液替换。
5)用合适的荧光仪器(Ex/Em=492/515nm)来检测。
【注 1】:BSA 和酚红会影响荧光,需谨慎使用。

【注 2】:HPF 和 APF 能用于溶液体系或胞内 ROS 检测。


注意事项:
1)APF 和 HPF 仅用于科研研究,不可用于体外诊断研究。
2)APF 和HPF 产生的荧光相对于其他活性氧探针比如 DCFH 弱很多,这是探针本身的特性决定的(见附表 1 活性氧探针(HPF, APF, DCFH)对各种活性氧物质的反应特异性)。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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